CRISPR/Cas9技术的应用性研究

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2016.07.003

畜牧兽医学报 ›› 2016, Vol. 47 ›› Issue (7): 1316-1323.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.07.003

CRISPR/Cas9技术的应用性研究

舒磊磊¹，甲芝莲²，吴勇浒²，索伦^3* ，贾丽玲^2*

（1.上海交通大学生命科学技术学院，上海 200240；2.上海交通大学系统生物医学研究院，上海 200240；3.上海交通大学医学院附属第九人民医院，上海 200011）

收稿日期:2016-01-21 出版日期:2016-07-23 发布日期:2016-07-23
通讯作者: 索伦，副研究员，硕士生导师，主要从事基因在体功能研究，E-mail：suoyunfei@126.com；贾丽玲，实验师，E-mail：jllmao@126.com
作者简介:舒磊磊（1990-），男，安徽六安人，硕士生，主要从事分子和遗传生物学方面的研究，E-mail：leilshu@163.com
基金资助:
国家自然科学基金(31200825)

The Application Research of CRISPR/Cas9

SHU Lei-lei¹，JIA Zhi-lian ²，WU Yong-hu²，SUO Lun^3* ，JIA Li-ling ^2*

(1.School of Life Sciences and Biotechnology，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai 200240，China；2.Institute of Systems Biomedicine，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai 200240，China；3.Shanghai Ninth People’s Hospital，Shanghai Jiao Tong University School of Medicine，Shanghai 200011，China)

Received:2016-01-21 Online:2016-07-23 Published:2016-07-23

摘要/Abstract

摘要：

旨在探索CRISPR/Cas9技术的新应用，本研究通过在小鼠遗传操作（Genetic manipulation）中使用该技术，创建了一种在活体组织内研究基因功能的方法。通过胚胎电转、免疫组化和PCR分析等手段，结果发现，针对DCX基因进行编辑，再现了DCX下调导致神经元迁移障碍的表型，说明该技术能够用于小鼠遗传操作中下调基因表达；其次，该技术还成功应用于Pcdhα基因簇的编辑并研究了基因簇恒定区的功能；最后，通过基因型鉴定发现，胚胎电转中使用CRISPR/Cas9会导致目的基因的敲除、反转和重复事件的发生。综上所述，在小鼠胚胎电转中使用CRISPR/Cas9技术，能够成功编辑目的基因，从而实现活体组织内研究基因的在体功能。

Abstract:

To investigate new application of CRISPR/Cas9 technology，we established a method to study genes function in living organism by the application of CRISPR/Cas9 in genetic manipulation.By using in vivo electroporation，immunohistochemistry and PCR analyzing，we first validated the function of DCX and the results indicated that CRISPR/Cas9 could be used in down-regulated gene expression in mouse genetic manipulation.Then this method was also used to study the function of constant exons of Pcdhα cluster. To further clarify the mechanism that led to the phenotype of neuron migration defects by DCX，we designed experiments to identify the genotype of target genes.The results indicated that CRISPR/Cas9 could lead to deletion，inversion and duplication of target genes.In conclusion，CRISPR/Cas9 technology could be used in mouse genetic manipulation and edit the target genes efficiently，which might be an ideal method to research gene function in living organism.

中图分类号:

S813.3

舒磊磊，甲芝莲，吴勇浒，索伦，贾丽玲. CRISPR/Cas9技术的应用性研究[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(7): 1316-1323.

SHU Lei-lei，JIA Zhi-lian，WU Yong-hu，SUO Lun，JIA Li-ling. The Application Research of CRISPR/Cas9[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2016, 47(7): 1316-1323.

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